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實(shí)驗(yàn)時(shí)刻
軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)
軟瓊脂克隆形成又名非錨定依賴性生長實(shí)驗(yàn)(Anehorage-independentassay），利用軟瓊脂為培養(yǎng)介質(zhì)，使細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下生長。
軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)方法簡單，適用于貼壁生長的細(xì)胞。
細(xì)胞克隆形成率表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量，主要反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
Part 01.
實(shí)驗(yàn)材料
Part 02.
實(shí)驗(yàn)操作流程
常見問題與解答
A：細(xì)胞接種密度與最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果密切相關(guān)，若細(xì)胞太多，形成克隆數(shù)目太多，處理結(jié)果時(shí)數(shù)克隆不僅容易出錯(cuò)，而且圖片很難看（下圖左）。細(xì)胞太少，不能形成克隆。如下圖所示：
上圖我們看到3株癌細(xì)胞在6孔板克隆形成圖片，第一個(gè)明顯鋪板細(xì)胞太密集，導(dǎo)致難以統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)；中間那個(gè)正好，最后面那個(gè)細(xì)胞數(shù)量偏少，且細(xì)胞鋪板不均勻。因此，為了獲得美觀的圖片和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，第一次實(shí)驗(yàn)最好設(shè)置細(xì)胞接種梯度，如500-1000-2000-5000個(gè)/孔挑選出最合適的接種密度。細(xì)胞在進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn)時(shí)要求有95%以上的分散度，否則結(jié)果的準(zhǔn)確度會(huì)受到很大影響；另外注意細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)建議多計(jì)數(shù)幾次。
A：并非每種細(xì)胞都可以形成克隆，克隆形成率與細(xì)胞本身增殖能力有關(guān)。還與接種細(xì)胞密度，加入培養(yǎng)液的體積、血清濃度有關(guān)。因該實(shí)驗(yàn)處理時(shí)間較長，應(yīng)給細(xì)胞多加培養(yǎng)基，如每孔4ml，或者3天更換一次培養(yǎng)基，以供給細(xì)胞充足的營養(yǎng)。
END
